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| 荧光分光光度计的组成结构和使用荧光分析的方法 |
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荧光分光光度计的组成结构和使用荧光分析的方法荧光分光光度计荧光分光光度计亦由光源，单色器、液槽和受光器组成。与分光光度计不同，它有两个单色器，一为激发光单色器，一为荧光单色器高压汞灯在使用过程中不可关闭电源，如在使用过程中汞灯熄灭，必须等待汞灯完全冷却后，才可以重新接上电源。氙弧灯所发出的光强度大，且是连续谱线，包括250—700nm光域。而且在300—400nm整个波段内，所有的射线强度几乎相等。 2．单色器：在荧光分光光度计中液槽前装一个单色器，以得到一定波长的激发光，在液槽底部恰好与前一单色器垂直方向另装一个单色器以得到一定波长的荧光。单色器用光栅或石英棱镜做成，光栅造价低而灵敏度高。 3．受光器：荧光分光光度计需用全自动精密培增管为受光器，因通过光栅或棱镜的单波长荧光很弱，硒全自动精密池难以测量。 4．液槽：荧光计中液槽要用低荧光材料制成，通常用石英。液槽形状以正方形或长方形为宜。因为这类形状的液槽散射光的干扰较小。低温荧光分析所用液槽是在石英液槽之外套上一个盛液氮的透明的石英外壳。 5．荧光分光光度计的光学系统：荧光分光光度计的光学系统。该仪器激发光单色器和荧光单色器都采用双色单色器，以提高分辨本领和降低散射光的干扰。该仪器的激发光单色器系用一个石英棱镜配上一个光栅，荧光单色器则采用两个光栅。光栅刻线均为600条／毫米。激发光单色器及荧光单色器的分辨率为0．5和0．2nm，色散分别为7．5及2.7．nm／mm。光源为500氙灯，用滤光片滤去在200—800nm区的高次反射光。荧光分析的工作方法 一、标准曲线法：用一系列荧光物质的标准溶液在一定条件下测其荧光强度，然后以荧光强度对浓度绘制标准曲线。在相同条件下测定试液的荧光强度，从标准曲线找出试液荧光物质的浓度。 绘制标准曲线时，需用标准系列中浓度***大者为基准校准荧光强度为100，用空白溶液调节读数为零。为了使不同时间所绘制的标准曲线一致，每次均采用同一基准镕液进行校准。 二、差示法：在分光光度法中当试液浓度太大吸光度读数高于0．8时，必须采用差示法。所谓差示法就是配制一系列标准溶液并把试液浓度包括在其中。用一个浓度***小的标准溶液， (相当于平时的空白溶液)将仪表读数调至100，以浓度***小的标准溶液为原点，绘制标准曲线。然后测量试液的吸光度，从标准曲线找出试液浓度。 在差示荧光法中，则是先用一个比试液荧光强度较小的标准溶液(例如浓度为1微克／毫升)调节荧光强度读数为0，再用另一荧光强度比试液大的标准溶液(例如浓度为2微克／毫升)调节荧光强度读数为100。这样可使测定在1—2微克／毫升下进行。
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