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生物学物理特征复合物层析检测生物金相试样抛光机
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生物学物理特征复合物层析检测生物金相试样抛光机亲和层析 原理亲和层析是利用了大分子***独特的特性,即生物学特异性来纯化一种大分子的。因此,与通透层析和电泳等方法相比,亲和层析从理论上讲是能产生一个绝对的纯化作用,而通透层析和电泳等方法是以物理特性为基础的(对于一些有关的大分子来说,这些特性可能是十分相似的),所以往往不能得到所需要的纯度。 迄今,这种技术主要是用于蛋白质的纯化,但是从原理上说,也同样能适用于抗原和抗体;维生素、激素和药物的结合蛋白;药物“受休,’运载蛋白;多核蛋白体复合物;多酶复合物和阻遏物的纯化。 以酶作为例子,由于它的立体结构,所以只有很少数的化合物(配位体)能达到它的活性位置和调节位置,这些化合物可能是底物或是一种可逆的或不可逆型的效应物。就是对这些位置的特异的识别,构成了酶亲和层析的基础。倘若,这位置对配位体有很高的亲和力,结合是可逆的,并且在所选择的实验条件下配位体结合到位置上后不发生任何反应,那么纯化是可能的。 基本上,这技术是通过一种方式把配位休(通常是一种可逆的竞争抑制剂)共价地结合到一种适宜的不溶性的基质上,而又不损伤它与酶的结合能力。然后把一个杂的酶溶液加到浸泡在恰当缓冲液中的经配位体结合过的基质柱上。酶被选择性地留在柱上,不结合的杂质被洗脱下来。随后,用一种在不同pH和(或)不同离子强度的介质中的底物溶液把酶取代下来。 因此,这方法需要预先详细地认识酶的动力学特点,以便可以小心地设计***佳的实验条件。所选择的实验条件尽可能地与在一个正常的分离系统中研究酶的条件相一致。 必须认识到在任何一种大分子的纯化中,方法的原理遵循如下的通式:随着大分子逐渐被加到柱上,由于这过程是可逆的,因而促使了已停留在柱顶部的,但还没有真正被结合的另外一些大分子的结合。结果,出现了一个动态的过程,除了在复合物内的结合强度增加外,复合物的浓度也增加了。由此决定了纯化过程的效力。由于在加样时柱的效力逐渐增加,因此柱式方法必然要比杯式法更有效。

 


 
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