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样品不同光学焦面图像三维重构,获得整体三维图像 |
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对样品不同光学焦面图像三维重构,获得整体三维图像 光镜技术的第四阶段是发明了一些更精密的、具有更多新功能的新一代金相试样镶嵌机,其中***重要的是共聚焦激光扫描金相试样镶嵌机(confocal laser scanning microscope)。它在荧光金相试样镶嵌机的基础上全面更新,利用激光作为点光源照射标本,在光学焦面上形成微米级的光点。所激发的荧光通过物镜与分光器后,送到探测器。光源和探测器前方各有一个针孔,光点通过一系列透镜同时聚焦到这两个针孔,这便是“共聚焦”的含义。这样,来自光学焦面的光可以汇聚在针孔范围之内,而其他散射光一概被排除在针孔之外。以激光逐点扫描样品,探测器也逐点捕获对应光点的共聚焦图像,并转为数字传至计算机。通过计算机软件进行图像处理后,***终在屏幕上显示整个焦面的图像。如果需要,还可以对样品不同光学焦面的图像进行三维重构,以获得整体三维图像。 原始的全自动精密金相切割机照相机其实比一般照相机简单,它不需要镜头等光学部件,因为金相试样镶嵌机已经具备了光学系统。它只需要一个照相机底座,安装在金相试样镶嵌机的镜筒上,对焦后手动按下快门即可摄取图像。后来又发明了自动控制曝光系统,能依据样品影像的明暗、颜色等参数,精确地计算出曝光时间。这样不仅能拍摄黑白照片,还能拍摄彩色照片;不仅能拍摄明视野图像,还能拍摄暗视野、干涉差、荧光等图像;不仅能拍摄负片,还能摄制用于幻灯播放的反转片。再后来,随着数字技术的问世,数码相机逐渐流行,全自动精密金相切割机摄影也以CCD+相机取代了传统的胶卷式相机,其优点正如一般数码相机,就不必赘言了。为了减少全自动精密传输中的噪音,在高级金相试样镶嵌机上还设置了在低温条件下工作的冷却式CCD(cooled CCD),特别适用于摄取高清晰度的荧光全自动精密金相切割机图像。
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